تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت سلول به روش PCR

نویسندگان

  • اخلاقی , فاطمه
  • تبرایی , بهمن
  • حسینی, زهرا
  • شاه حسینی, محمدحسن گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهریار، شهر قدس
  • شکرگزار , محمدعلی
  • مسلمی , الهام
چکیده مقاله:

مقدمه و اهداف: آلودگی کشت های سلولی در شرایط آزمایشگاه با گونه های مایکوپلاسما می تواند به مشکلاتی در ارگانیسم های زنده منجر شود. بنابراین، تهیه یک پروتکل تشخیص روتین برای عفونت های مایکوپلاسمایی، جهت به دست‌ آوردن نتایج تحقیقاتی قابل اعتماد، ضروری و انکارناپذیر است. به دلیل محدودیت در روش های متواتر، این اواخر تکنولوژی هایی بر پایه اسید نوکلئیک خصوصا روش های بر پایه واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) برای شناسایی و تشخیص تمامی گونه های جنس مایکوپلاسما، به عنوان روشی سریع و ویژه ارایه شده اند. هدف از انجام این مطالعه ارایه روشی بر پایه PCR جهت آشکار کردن مایکوپلاسماها در نمونه های کشت سلولی و سایر فرآورده های بیولوژیک مانند واکسن ها بود. روش بررسی: با استفاده از پرایمرهای مخصوص جنس SHAH-GPO-3 و MGSO و گونه های استاندارد، روش PCR بهینه شد و از جهت حساسیت و ویژگی بررسی گردید. سپس از کشت های سلولی DNA استخراج و با PCR آزمایش شد. محصول تکثیری کلون و تعیین توالی گردید. یافته ها: در این مطالعه، روش حساسی از PCR تهیه و جهت تشخیص جنس مایکوپلاسما در آلودگی های فرآورده های بیولوژیک توسعه داده شد. ژن 16S rDNA به دلیل داشتن سکانس های مشترک و ثابت به عنوان ژن هدف، جهت تکثیر با پرایمرهای تغییر یافته مورد استفاده قرار گرفت. این روش حساس توسعه داده شده، با محصولی به اندازه 272 bp، دارای حساسیتی در حد 10 کپی از DNA ژنوم هدف بوده و با DNA بسیاری از میکروارگانیسم ها، رده های سلولی انسان، واکنش متقاطع ندارد. از این جهت، پرایمرها دارای حساسیت و ویژگی فوق العاده بالایی هستند.نتیجه گیری: سنجش PCR بر مبنای سکانس های ثابت و مشترک موجود در 16S rRNA، یک تکنیک مفید، قابل اعتماد با حساسیت، ویژگی، و دقت بالا جهت شناسایی آلودگی های مایکوپلاسمایی در کشت سلول و سایر فرآورده های بیولوژیک است. البته تحقیقات بیشتری در زمینه استخراج DNA، روش های تغلیظ نمونه، سکانس های هدف، روش شناسایی محصول تکثیری باید انجام گیرد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت سلول به روش pcr

مقدمه و اهداف: آلودگی کشت های سلولی در شرایط آزمایشگاه با گونه های مایکوپلاسما می تواند به مشکلاتی در ارگانیسم های زنده منجر شود. بنابراین، تهیه یک پروتکل تشخیص روتین برای عفونت های مایکوپلاسمایی، جهت به دست آوردن نتایج تحقیقاتی قابل اعتماد، ضروری و انکارناپذیر است. به دلیل محدودیت در روش های متواتر، این اواخر تکنولوژی هایی بر پایه اسید نوکلئیک خصوصا روش های بر پایه واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr...

متن کامل

درمان آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت سلول با سیپرو فلوکساسین و انروفلوکساسین: گزارش کوتاه

Background: Mycoplasma contamination in cell cultures is considered as a major economic, research and production problem. In this study, mycoplasma-infected Vero cell lines were treated by various dilutions of ciprofloxacin and enrofloxacin in a timely manner. Removal of mycoplasma contamination from infected cell cultures was evaluated and demonstrated by polymerase chain reaction (PCR) method...

متن کامل

درمان آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت سلول با سیپرو فلوکساسین و انروفلوکساسین: گزارش کوتاه

زمینه و هدف: در این مطالعه رده های سلولی vero آلوده به مایکوپلاسما، با رقت های مختلف سیپروفلوکساسین و انروفلوکساسین که مانع همانندسازی dna و سنتز پروتیین می شوند، تحت درمان قرار گرفتند. روش بررسی: در این پژوهش اکتشافی که در آزمایشگاه پژوهش و ساخت واکسن هاری انسانی انستیتو پاستور از آبان 1392 تا خرداد 1393انجام گردید، رقت های مختلف آنتی بیوتیکی مورد استفاده و مقایسه قرار گرفت. عملکرد این روش درم...

متن کامل

استفاده از روش nested-pcr برای تشخیص آلودگی کشت های سلولی به ویروس pestivirus

در این مطالعه یک روش nested-pcr برای تشخیص دو ویروس bvdv از سویه nadl بهینه سازی گردید. در آزمایش rt-pcr، قسمتی از منطقه غیر قابل ترجمه ناحیه '5 ویروس به طول 249 جفت باز تکثیر شد. محصول pcr در وکتور r/t57ptz کلون گردید و نتیجه تعیین ردیف اسیدهای نوکلوتیدی آن اختصاصی بودن آزمایش را تایید نمود. سپس پرایمرهای داخلی انتخاب و آزمایش nested-pcr انجام گردید و یک قطعه dna به طول 155 جفت باز تکثیر شد. م...

متن کامل

ارزیابی روش PCR جهت تشخیص آلودگی به باکتری سالمونلا انتریتیدیس در محصولات ماکیان در شهرستان کرج

 سابقه و هدف: باکتری سالمونلا انتریکا سرووار انتریتیدیس یکی از سویه­های شایع درگیر کننده ماکیان است که از طریق مواد غذایی آلوده قابل انتقال به انسان می­باشد. در این مطالعه از روش PCR برای تشخیص باکتری سالمونلا انتریتیدیس در محصولات ماکیان استفاده شد.روش بررسی: در این پژوهش بنیادی، 80 نمونه از محصولات ماکیان از مراکز عرضه در شهرستان کرج و توابع آن تهیه گردید. DNA نمونه­ها به روشsalting out  استخ...

متن کامل

بررسی آلودگی با مایکوپلاسماهای ژنیتال در زنان مبتلا به واژینوز باکتریایی کشت منفی با روش PCR

زمینه و هدف: مایکوپلاسماهای ژنیتال عامل عفونت دستگاه ادراری- تناسلی می باشند. این ارگانیسم ها در ارتباط با واژینوز باکتریایی، بیماری التهابی لگن، اندومتریت، سرویسیت، اورتریت غیر گنوکوکی، سقط جنین خود به خودی، تولد نوزاد نارس، پنومونی و مننژیت نوزادی می باشند. این مطالعه برای تعیین میزان توانایی PCR در شناسایی و تشخیص مایکوپلاسماهای ژنیتال در نمونه های کشت منفی زنان مبتلا به واژینوز باکتریایی صو...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 2  شماره 2

صفحات  15- 25

تاریخ انتشار 2008-09

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

کلمات کلیدی

کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023